Отселектированные на долголетие гидробионты

— новый источник лечебных стресс-протективных и противоопухолевых веществ
Объединенный научный журнал «Биомедицина» № 14, 2005 г.

Одной из самых опасных болезней, поражающих здоровье человека является рак. Почти 7 млн людей в мире ежегодно умирают от страшного недуга и число это ежегодно растет. Неудивительно, что победа над раком является древней мечтой человечества.

д.б.н. В. В. Зюганов , Е. Г. Попкович , д.б.н. С. М. Калюжин *,
Институт биологии развития им.  Н. К. Кольцова РАН, Москва
*Центр полярных экосистем «Варзуга», Мурманск

Arctic Hydrobionts with Expanded Life Span As a New Source of Medically Active and Antitumor Compounds
v. V. Ziuganov, E. G. Popkovitch and S. M. Kaliuzhin

Введение

В мире не прекращается поиск новых противоопухолевых биопрепаратов из природных организмов. Особое внимание уделяются экстрагированию биопрепаратов из водных организмов — гидробионтов. Надежды связаны с тем, что некоторые гидробионты способны продуцировать вещества, эффективно нейтрализующие микробов и паразитов, а также вырабатывать субстанции ядовитые или отпугивающие хищников. Биоактивнаые вещества, обладающие противоопухолевой, противовоспалительной, антимикробной и антивирусной активностью (липиды, мукополисахариды, пептиды, гликопротеины) в последние годы выделены из устриц, мидий, мерценарий и других моллюсков, крабов, креветок, трепангов, червей-полихет , пиявок, асцидий, лягушек и многих видов рыб: палтуса, акул, кефалей, вьюна, и морских коньков.

Широко известно медицинское значение морских коньков рода Hippocampus (отряд Колюшкообразные), используемых много веков в традиционной медицине стран юго-восточной Азии как геропротектор и в лечении сердечно-сосудистых заболеваний, некоторых опухолей, нарушений половой функции.

Однако, мало кто знает о медицинских возможностях ближайших родственников коньков — колюшковых рыбах (сем. Gasterosteidae), обитающих в северном полушарии и обладающих поразительной способностью к ранозаживлению. Жир колюшки успешно применялся в блокадном Ленинграде в военные годы в качестве средства для лечения ран и ожогов, поскольку препарат содержит каротин, жирные омега-кислоты и витамин, А, ускоряющие регенерацию (Зюганов В. В., 1991).

Для колюшек характерна удивительная способность продуцировать во внешнюю среду экстраорганизменные белки типа фиброиновых нитей паука, шелкопряда или биссуса устриц. Клетки почек самца колюшки в нерестовый сезон начинают секретировать клейкий гликопротеин молекулярной массой около 200 килодальтон, образующий вместе с рядом других легких белков, пептидов, мукоидных субстанций, клей для строительства из водорослей гнезда, куда откладывается икра. Недавно выяснилось, что этот секрет с одной стороны имеет свойства синхронизировать развитие икры, а с другой стороны вызывает гибель эмбрионов, развивающихся с уродствами, т.е ингибирует тератогенез. Результаты испытания созданного на основе этого секрета биопрепарата (БАД), на больных опухолями лососях, морских свинках с поврежденными покровами тела, мышах с перевиваемой карциномой и добровольцах с симптомами депрессии и опухолями мозга и поджелудочной железы показали высокий терапевтический эффект (Зюганов, 1991; Зюганов, Ташенов, 2004; Зюганов, Попкович, 2005).

Старение колюшки, горбуши и человека: сходство в механизмах до деталей. Различие — в темпах.

Для колюшек — мелких рыб длиной тела 5–6 см, характерно, что в некоторых популяциях все производители гибнут после первого же акта размножения в результате ускоренного старения (прогерии), подобно тихоокеанским лососям рода Oncorhynchus — горбуше, кете или нерке. Рыбы этого типа (семелпарные) умирают после первого нереста вследствие включения особой биохимической программы, в которой ведущую роль играют стероидные гормоны, в частности гормон стресса кортизол.

Ускоренное старение рыб включается от повышения деятельности цепочки: гипоталамус — гипофиз — кора надпочечников — увеличение кортизола — атрофия вилочковой железы (со снижением иммунитета) — повышение в крови глюкозы, жирных кислот, холестерина, гормона инсулина — смерть от инфаркта миокарда, почек и инсультов. Старение лососей и колюшек можно предотвратить, если у неполовозрелых рыб удалить гонады (кастрировать) или надпочечники. Тогда их жизненный цикл продлевается в 2 раза.

Отечественный врач проф. В. М. Дильман (1986) был первым, кто обратил внимание на то, что гормональные сдвиги при старении семелпарных рыб и человека совпадают до деталей. Разница лишь в том, что у человека во много раз медленнее происходит то, что остро протекает у горбуши. Недавно на нерке из Колорадо (США) было показано, что отложение бета амилоидных бляшек на нейронах мозга умирающего после нереста лосося поразительно напоминает течение болезни Альцгеймера у человека (Maldonado et al., 2002). Исследователи все больше склоняются к мысли, что старение и связанные с ним системные болезни, в том числе рак, формируются не за счет угасания, а напротив за счет перенапряжения деятельности систем, регулирующих энергетические процессы, адаптацию и размножение. В частности, за счет возрастания активности перевозбужденного гипоталамуса падает его чувствительность к сигналам отрицательной обратной связи.

Опыты по отмене программы старения рыб

Изучая проблемы генетики и эволюции колюшковых рыб, впервые о геронтологическом значениии этих рыб и их медицинском использовании мы задумались 20 лет назад. Тогда в 1985 году впервые была предпринята попытка экспериментально «выключить» программу посленерестовой гибели у камчатской трехиглой колюшки Gasterosteus aculeatus не методом кастрации, а путем скрещиваний морской и пресноводной форм, акклиматизации гибридов в Арктическом регионе и длительной селекции потомков. Тем самым мы попытались продлить предельный возраст рыб, живущих в исходных водоемах 1 год (Ziuganov et al, 1987).

В результате многолетней селекции в природных водоемах (гранитных прудах-карьерах , расположенных вблизи Полярного Круга) с необычными условиями среды нами выведены гибридные генотипы трехиглой колюшки с повышенной поведенческой стрессоустойчивостью и продленным жизненным циклом до 7–8 лет (Ziuganov, 1995). Таким образом, семелпарные или моноцикловые рыбы переведены в разряд итеропарных (многолетних) или полицикловых рыб. Примечательно, что у этих гигантских (до 11 см) рыб-долгожителей , феноменально устойчивых к ранам, а также инфекционным и паразитарным заболеваниям, увеличилась на 150–200% продукция упомянутого выше секрета железистых клеток почек — клея (Зюганов, Ташенов, 2004). Известно, что этот секрет способны вырабатывать все виды колюшковых рыб.

Нужно отметить, что кроме основной цементирующей функции в гнезде, куда самка откладывает икру, и которую самец тщательно охраняет, секрет самца может использоваться, как защита икры от возбудителей инфекций. Кроме того, самец использует клей как антипаразитарное и ранозаживляющее средство, а также как запаховый стимулятор сексуальности (феромон), привлекающий самок (Зюганов В. В., 1991). Недавно было выяснено, что рыбы используют его и как антидепрессант. Поедание клея рыбами снимает стрессы от конфронтаций на нерестилищах и тревожную депрессию у колюшек. Выведенные в результате селекции рыбы-долгожители , практически перестали болеть, стали медленнее стареть и дольше жить на 5–7 лет. В результате генетического гетерозиса улучшилась работа гипоталамуса и других подкорковых структур мозга и оптимизировался нейроэндокринный контроль нереста колюшек (Зюганов, Ташенов, 2004).

Тестирование биопрепарата в Институте Красоты

В качестве доноров БАД были использованы колюшки-долгожители . Клей этих рыб мы использовали в опытах в качестве ранозаживляющего, стресс-протективного и противоопухолевого средства. Этот биопрепарат был зарегистрирован в органах Минздрава и после проверки на токсикологическую, микробиологическую, физико-химическую и клиническую безопасность в испытательных центрах, препарат получил положительное Санитарно-эпидемиологическое заключение №  77.99.11.915 .Д.001282.03.02.

В институте Красоты протестированы 30 морских свинок. Применение препарата увеличивало скорость заживления кожных ран (вырезался квадрат дермы площадью 1×1 см) на  8-й день после операции на 62%, на  12-й день — на 27% у опытных животных по сравнению с контрольной группой. Препарат сократил сроки заживления ран на 5 суток, что составляет 19,3% по сравнению с контрольной группой. На базе этих данных, а также результатов тестов на белых мышах (n=36) и белых крысах (n=30) Институт сделал заключение об отсутствии раздражающего и аллергезирующего действия на кожу и слизистые оболочки Было подтверждено также отсутствие острой и подострой токсичности и цитотоксического действия на эмбриональные диплоидные клетки человека (ДКЧ) (Протокол № 104 от  19.02.01 ). В итоге Институт Красоты заключил, что препарат обладает выраженным ранозаживляющим действием и рекомендован для введения в рецептуры лечебных косметических средств с целью ускорения процессов регенерации в коже.

Мыши с карциномой в Институте онкологии

Тесты на противоопухолевую активность биопрепарата у мышей с привитыми опухолями были проведены в НИИ онкологии им.  Н. Н. Петрова ( Санкт-Петербург ). Мышам линии NMRI внутрибрюшинно была привита асцитная карцинома Эрлиха (10⁶ клеток) и, начиная со следующего после перевивки опухоли дня, 10 мышам давали питьевую воду с добавлением биопрепарата (1:200) и 10 мышей получали питьевую воду без препарата и служили контролем. Свежий раствор препарата готовили через день. Измеряли ежедневно количество выпитой животными жидкости, которое составляло 3.5–4.5 мл на мышь в день и было одинаково в обеих группах. Регистрировали день гибели животных. Затем определели насколько увеличилась средняя продолжительность жизни мышей под влиянием биопрепарата.

Таблица 1. Результаты испытания лечебного препарата на мышах линии NMRI с привитой асцитной карциномой Эрлиха (2004 г.).

* — отличие достоверно у сравниваемых групп (опыт — контроль). p = 0.03.

В заключении Института указано: «Все мыши контрольной группы погибли с 9 по 13 день после перевивки опухоли. В группе мышей, получавших препарат, 13 дневный срок пережили 50% мышей. Средняя продолжительность жизни мышей под влиянием препарата достоверно увеличилась на 16.7% (табл. 1). Учитывая пептидную природу и низкую токсичность мукуса, полученный предварительный результат заслуживает серьезного внимания и позволяет рекомендовать препарат „мукус“ для исследований противоопухолевой активности на опухолевых штаммов разного гистогенеза». Таким образом, даже ослабленная в 200 раз (!) доза препарата обнаружила достоверный лечебный эффект на мышах зараженных раком.

Лососи с опухолью эпителиомой на ферме

Эпидермальная папиллома (эпителиома) регистрируется у молоди атлантического лосося севера России и стран Скандинавии с  70-х годов. Отмечается высокая заболеваемость — 50% и гибель (30–90%) больных рыб возраста 1–4 года на лососевых фермах. Причинами возникновения опухолей считаются загрязнения водоемов канцерогенами и коканцерогенами (нитрозамины, бензпирен и др.) и вирусными агентами типа герпесвируса. В начале на стадии I у рыб на коже появляются утолщения светлой окраски с шероховатой поверхности. Затем на стадии II образуются оспоподобные наросты парафинообразной консистенции с мелкозернистой поверхностью (рис. 1). Величина и количество наростов бывают различны — от единичных или множественных бляшковидных пятен до образования конгломератов. Они расположены на спине, боках тела, голове, плавниках. На поздней стадии III после отторжения опухолей образуются язвы разного размера, при осложнении которых вторичной инфекцией развиваются гнойно-некротические воспаления кожи и мускулатуры, заканчивающиеся распадом глубоких тканей и омертвением плавников (Зюганов, Калюжин, 2004).

Таблица 2. Результаты испытания лечебного препарата 2000—2002 гг. на больных опухолью эпителиомой II стадии пестрятках-двухгодовиках лосося Salmo salar, содержащихся 60 суток в садках на Умбском рыбоводном заводе в Мурманской области.

* — отличие достоверно у сравниваемых групп (опыт — контроль). p < 0.05. Экспериментальным рыбам 3 раза в неделю в течение 2 мес. делали инъекцию в хвостовой стебель внутримышечно 0.1 мл препарата инсулиновым шприцом. Доза 1 мг сухого вещества на 10 г или 0.1 г на 1 кг живого веса. Контрольным рыбам делали инъекцию физиологического раствора по той же схеме.

Как видно из табл. 2, получен хороший терапевтический эффект: выживаемость мальков II стадии болезни возросла с 7–11% (контроль) до 89–96% или в среднем в 10 раз. Ремиссия (исчезновение проявлений болезни) возросла с 0% (контроль) до 85–89%. При этом результаты оказались хорошо воспроизводимыми в течение всех трех лет опытов.

ДОБРОВОЛЬЦЫ С ДЕПРЕССИЯМИ

В ходе доклинических испытаний наблюдали 200 волонтеров (табл. 3) с жалобами на депрессивные расстройства легкой и средней степени, циклотимию, нейроциркуляторную дистонию по гипотоническому типу после перенесенного ОРВИ. Волонтеры опытной группы использовали эликсир 3 раза в день по 10–15 мл внутрь за полчаса до еды. Результаты сравнивали с пациентами контрольной группы с такими же диагнозами, которые принимали транквилизаторы.

Таблица 3. Эффективность использования биопрепарата «Арктика+» добровольцами (n=200) с симптомами депрессии в сравнении с пациентами, принимающими транквилизаторы.

У большинства волонтеров отмечено улучшение настроения, снижение уровня тревожности, идей виновности. У волонтеров нормализовался сон, при этом не было побочных эффектов в виде сонливости и эффекта отмены. К концу опыта устранились соматические расстройства: головная боль, нарушения сердечно-сосудистой деятельности и  желудочно-кишечных расстройств. Биопрепарат повышает умственную работоспособность и снижает утомление, он особенно полезен при депрессивных расстройствах, когда пациент вынужден сочетать лечение с трудовой деятельностью.

Регрессия опухолей у добровольцев

Из-за ограниченности объема статьи, ниже приведены лишь два примера по успешному излечению биопрепаратом безнадежных форм различных опухолевых заболеваний, при которых пятилетняя и даже годовая выживаемость крайне низки. Например, по раку поджелудочной железы соотношение заболевших: умерших мужчин в 2002 г. во всем мире была 116 тыс. чел.: 112 тыс. чел. (смертность 97%), для женщин этот показатель равен 101 тыс.: 101 тыс.

Больной Ф., 64 года, наблюдался в Московской клинической больнице № 15 им.  О. М. Филатова с 2002 с диагнозом: рак головки поджелудочной железы. Рак фатерова соска. Механическая желтуха. Не проводились: химио- и лучевая терапия, хирургическое лечение.

Из выписки из истории болезни: «В октябре 2002 госпитализирован с жалобами на слабость, тяжесть в правом подреберье, желтушность склер и кожных покровов. Был болен в течение последних 2-х месяцев… УЗИ. Дуоденоскопия, ретроградная панкреатохолангиография, лечебная ЭПСТ. Назобилиарное дренирование. Биопсия. Произведено рассечение сосочка на протяжении 1 см, при этом отмечалась инфильтрация тканей по ходу папилотомной раны. Диагноз: Опухоль головки поджелудочной железы. Опухоль дистального отдела холедоха. В области головки поджелудочной железы определяется зона пониженной эхогенности до 39 мм. Выписан с рекомендацией консультации в НИИ им. Склифосовского о радикальном хирургическом лечении».

От операции отказался и выразил желание принять участие в доклиническом испытании биопрепарата «Арктика» в качестве добровольца. Проведен 1 цикл перорального приема 500 мл препарата в течение 1,5 месяцев. Отмечалось стабильное улучшение самочувствия. Больной от лежачего вернулся к нормальному подвижному образу жизни.

При контрольном обследованиив декабре 2002 года, по данным Компьютерной Томографии (КТ) выявлен полный регресс опухоли, холедох не расширен. Наблюдение продолжается (рис. 2).

Кавернозная ангиома — относится к порокам развития сосудов или сосудистым мальформациям центральной нервной системы и составляет 5–13% всех сосудистых аномалий головного мозга.

Больная М., 49 лет, наблюдалась в областной клинической больнице г. Винницы, Украина, с октября 2002 г. Обратилась с жалобами на слабость, головную боль. Первичный диагноз — микроинсульт. КТ дополнительно выявила кавернозную ангиому моста головного мозга в левом полушарии: опухоль 20×20 мм. В ноябре больная испытала резкое ухудшение состояния с развитием правостороннего гемипареза (паралича), афазией (нарушение речи). Было почти утеряно желание жить. Однако больная согласилась быть добровольцем в испытаниях эликсира. Улучшение самочувствия с постепенным восстановлением речи, появлением движения в правых конечностях, прекращением головных болей началось в первые недели лечения эликсиром.

Тем временем, к апрелю 2003 г. размеры опухоли увеличились до 23×23 мм, (рис. 3). В мае 2003 г. больная уже встала на ноги и вела обычную жизнь домохозяйки, проживающей в степной сельской местности. КТ выявила, что к ноябрю 2003 г. (окончание лечения эликсиром), произошло уменьшение опухоли на 90%, «разбиение» на мелкие островки, а через полгода после окончания лечения — опухоль полностью регрессировала (рис. 3). Осложнений лечения не было. После лечения у больной сохраняется стабилизация благотворного процесса, которая продолжается по настоящее время.

Почечный секрет колюшки — онкогеропротектор?

После многих успешных испытаний стало ясно, что биопрепарат, разработанный на основе секрета колюшковых, является полезным для лечения животных и не имеет побочных эффектов, возникла идея о применении его в качестве стресс-протективного препарата и геропротектора у человека. Прежде всего, следуя традициям ученых, авторы в течение длительного времени (с 1999 года) испытывали препарат на себе. Побочных эффектов не обнаружилось. По ходу дела возникло соображение, что при пероральном применении препарата в чистом виде часть целебных субстанций может не попасть в кровь и эффект препарата будет ослаблен. Логично было употреблять препарат в виде спиртовой настойки, что обосновано многовековой практикой народной медицины использования целебных настоек, бальзамов и эликсиров. Для усиления действия биопрепарата, было решено смешивать препарат с коньяком пятилетней выдержки высшего качества.

Почему биомолекулы введены в коньяк? Целебные вещества гидробионтов находятся в виде коллоидных растворов сложных соединений (гликопротеинов, гликопептидов, мукополисахаридов), которые с трудом усваиваются организмом человека. Пищеварительные соки не в состоянии их расщепить, а в нерасщепленном виде они не проникают через стенки кишечника в лимфу и кровь. Напротив, в процессе спиртовой экстракции многие из таких комплексов распадаются на более простые составляющие, которые без потерь долго сохраняются в растворенном виде и великолепно усваиваются нашим организмом. Кроме того, коньяк известен полезным действием на сосудистую систему.

Авторы принципиально отказались от добавления в препарат, улучшителей и  каких-либо других искусственных добавок. В составе эликсира консервантом является пятилетняя настойка натурального виноградного спирта на дубе, образующая сложные эфиры с лечебными компонентами (эликсир через 2–3 недели приобретает своеобразный цветочный запах), что способствует быстрому всасыванию в кровь уже в ротовой полости и пищеводе. Помимо белков, пептидов, аминокислот, природных полисахаридов и липидов, продуцируемых гидробионтами, в состав эликсира входят и растительные компоненты. Коньячным спиртом из дуба экстрагируются в концентрации до 5 г/л  гемицеллюлоза, танины (дубильные вещества), ароматические альдегиды, эфиры, органические кислоты, пигменты и полифенолы (флавоноиды, антоцианы, флавонолы, ресвератролы, фенольные кислоты, кумарины, хиноны), а также лигнин и растворимые волокна: пектины и камеди. Эти вещества также благотворно действуют на  сердечно-сосудистую систему и обмен веществ. Они препятствуют сгущению крови: понижают слипание кровяных пластинок, расширяют диаметр сосудов, предотвращают отложению холестерина и других «плохих» жиров на стенках сосудов и кишечника, оказывают антиоксидантное действие, снижают уровень гиперинсулинизации.

В течение нескольких лет регулярного приема авторами небольших доз препарата в виде эликсира (2–3 раза в день по 10–15 мл за полчаса до еды) по прописи характерной для многих целебных бальзамов: 2 недели приема — 2 недели пропуска, выяснилось, что эликсир в значительной мере компенсирует эффект переутомления, бессоницы, депрессии, нормализует кровяное давление, улучшает формулу крови (увеличивает гемоглобин до 150 г/л ., нормализует лейкоцитарную формулу). Применение эликсира вызывает прилив сил, стимулирует к физической активности, избавляет от  осенне-весенних простуд.

С механизмом действия не все ясно

Пока механизм действия биопрепарата остается до конца неясным. Достоверно подтвержденным фактом является то, что выживаемость зародышей в гнезде близка к 100%, когда самец колюшки ежедневно обрабатывает эмбрионов своим секретом. В то же время при искусственном выращивании икры колюшки в аквариуме в той же воде, даже при применении новейшего оборудования (фильтров, аэраторов, насосов, лекарств и т. п. ) в лучшем случае удается довести выживаемость зародышей до 30–40%, причем нередки случаи возникновения нарушений развития, хромосомных аббераций (триплоидии), уродств эмбрионов (Зюганов, 1991). Напомним, что секрет самца колюшки вызывает гибель именно тех эмбрионов, которые развиваются с уродствами, т.е ингибирует тератогенез. Возможно секрет стимулирует апоптотическую гибель всех атипичных клеток у неправильно развивающихся эмбрионов рыб. Поэтому, биопрепарат на основе этого секрета и стимулирует гибель опухолевых клеток у других видов рыб и вообще позвоночных животных (грызунов и человека).

После открытия феномена апоптоза в ХХ веке и получения доказательств его универсальности для всех клеток эукариот, стало ясным что апоптоз может играть важную роль и в регрессии опухолей Этот аспект требует дальнейшего изучения. Приведенные результаты, подтверждают эволюционную гипотезу А. В. Макрушина , о том, что онкогенез — это атавизм, извращенная подготовка организма к диапаузе и бесполому размножению почкованием при признаках ухудшения условий среды (биопрепарат от колюшки разворачивает эту подготовку вспять). Согласно гипотезе А. В. Макрушина (2004), эволюционным предшественником онкогенеза было семелпарное бесполое размножение наших отдаленных колониальных предков 500 млн лет назад в Кембрии.

Колюшки в антираковом центре в США

В заключение следует отметить, что геном трехиглой колюшки недавно стал интенсивно изучаться в Раковом Исследовательском центре им. Ф. Хатчинсона, Сиэттл, штат Вашингтон. Американские генетики получили интересные результаты изучения генома колюшки (имеющего большое сходство с геномом человека) и пытаются найти гены детерминирующие опухолевые процессы в организме.

Авторы благодарны д.б.н. А. Н. Лучнику , любезно предоставившему фото КТ (рис. 2,3), доктору В. И. Кану за комментарий к томограммам и профессору, д.м.н. В. Н. Анисимову за проведение испытаний противоопухолевой активности препарата на мышах. Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант №  05-04-48 587).

Литература

• Дильман В. М. Большие биологические часы. М.: Знание, 1986. 156 c.
• Зюганов В. В. Фауна СССР. Рыбы. Т. 5. вып.1. Семейство колюшковых (Gasterosteidae) мировой фауны. Л.: Наука, 1991. 261 c.
• Зюганов В.В., Калюжин С. М. Проблема паразитарных и опухолевых заболеваний атлантического лосося Salmo salar северо-западного региона // Объед. научн. журн. 2004. Т. 8. № 100. С. 63–70.
• Зюганов В.В., Ташенов С. Т. Нейроэндокринный и средовой контроль репродуктивного поведения короткоживущих рыб (сем. Gasterosteidae): полевые эксперименты по продлению сроков жизни рыб // Объед. научн. журн. 2004. Т. 14. № 106. С. 41–56.
• Зюганов В.В., Попкович Е. Г. Арктические костные рыбы с отмененной программой быстрого старения — потенциальный источник лечебных стресс-протективных и противоопухолевых веществ // Известия РАН. Серия биологическая. 2005 (в печати).
• Макрушин А. В. Эволюционные предшественники онкогенеза и старческой инволюции // Успехи геронтологии. 2004. Т. 13. С. 32–43.
• Пилат Т.П., Иванов А. А. Биологически активные добавки к пище (теория, производство, применение). М.: Авваллон, 2002. 710 с.
• Maldonado T.A., Jones R.E., Norris D. O. Timing of neurodegeneration and beta-amyloid (Ab) peptide deposition in the brain of aging kokanee salmon. // J. Neurobiology. 2002. v. 53. P. 21–35.
• Ziuganov v. , Golovatjuk G., et al. Genetically isolated sympatric forms of threespine stickleback in Lake Azabachije ( Kamchatka-peninsula , USSR) // Environ. Biol. Fish. 1987. v. 18, № 4. P. 241–247.
• Ziuganov v. Reproductive isolation among plate phenotypes of the threespine stickleback, Gasterosteus aculeatus, from the White sea basin and the Kamchatka peninsula, Russia // Behaviour. 1995. v. 132 № 15–16. P. 1173–1181.

Подписи к рисункам статьи В. В. Зюганова и др.

Рис. 1 Двухгодовики атлантического лосося, пораженные бляшковидными новообразованиями (эпителиома), с осложнением грибковым сапролегниозом (а) и здоровый малек лосося (б).

Рис. 2 Компьютерная томограммма поджелудочной железы больного Ф., 64 года (рак головки поджелудочной железы, рак фатерова соска.
а) — 8 окт. 2002, до лечения, червеобразные объемные образования (на фото: белого цвета) видны в левом верхнем углу на  2-х срезах; на одном снимке опухоль помечена цифрой «1»
б) — 9 дек. 2002 после лечения эликсиром через 2 мес. опухоль полностью исчезла.

Рис. 3 Компьютерная томограмма стволовых структур (моста) больной М., 49 лет, кавернозная ангиома моста в левом полушарии (а, в, д, ж — сагиттальная плоскость, б, г, е, з — горизонтальная плоскость).
а) и б) 23 окт. 2002 г., до лечения, опухоль 20×20 мм,
в) и г) 24 апр.2003, начало лечения, размеры опухоли увеличились до 23×23 мм,
д) и е) 5 ноя. 2003 г. окончание лечения, уменьшение опухоли на 90%, «разбиение» на мелкие островки,
ж) и з) 25 мая 2004 г., через полгода после окончания лечения — опухоль полностью регрессировала.